RNA干扰隐球菌cap10基因的siRNA表达载体的构建与鉴定

• 作者: 欧启水 江凌 程祖建 肖玉鹏 苏晓霁
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 新生隐球菌 cap10 RNA 干扰
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 358-359
• 页数: 2页
• 分类号: Q949.331+.4
• 语种: 中文

摘要

目的 构建cap10基因RNA干扰(RNAi)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,为将其应用于隐球菌的改造及隐球菌性脑膜炎的生物治疗奠定基础.方法 根据GenBank发表的cap10基因序列,按照干扰模板设计原则,选择设计1条可形成发夹结构的核苷酸序列,克隆连接到空载体psilencer 4.1-CMV neo中构建重组质粒ps 4.1 neo-cap10并测序鉴定.用LiAc化学法将重组质粒转染新生隐球茼细胞并用G418筛选.比较重组质粒转染前后新生隐球菌cap10基因表达量的变化.结果 成功构建针对cap10基因的ps 4.1 neo-cap10,经测序证实符合预期设计;ps 4.1 neo-cap10转染组新生隐球菌内cap10基因表达(175 534.6±47 004.3)copies/μl明显低于空质粒转染组(321 995.5±32 611.8)copies/μl和空白组(562 931.7±65 928.4)copies/μl,P<0.05.结论 成功构建cap10基因的shRNA表达载体,其可以明显抑制新生隐球菌细胞内cap10基因的表达.