RNAi沉默c-Met基因对黑素瘤A375细胞生物学行为的影响

• 作者: 吴蕊 周辉 唐吉云 喻标 景海霞 曾静 段德鉴 王超 田斌
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 黑素瘤细胞 RNA干扰 c-Met 增殖 侵袭
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 794-797
• 分类号: R739.5
• 字数: 3936字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨c-Met shRNA表达载体对人黑素瘤A375细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 以pGenesil-1质粒为载体,以c-Met为靶基因,构建shRNA表达载体,并将其转染至体外培养的人黑素瘤A375细胞中.倒置相差显微镜下观察经干扰后瘤细胞的形态学变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测转染细胞c-Met基因和蛋白的表达水平;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测转染后细胞的生长活力;Transwell小室法测定转染细胞体外侵袭能力.结果 构建了pGenesil-1-c-Met shRNA重组质粒,并成功转染A375细胞.转染后A375细胞缩小,变圆.RT-PCR显示转染后c-Met mRNA的表达显著降低,以48h为著,下降近64%;Western blot证实转染后蛋白的表达下降近65%;MTI法显示细胞的活力降低为(68.25±4.4)%;Transwell小室测定转染细胞体外侵袭能力明显下降.结论 pGenesil-1-c-Met shRNA重组质粒明显下调c-Met在黑素瘤细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞增殖及其侵袭能力.