siRNA表达载体对乙酰肝素酶基因有效序列的筛选

• 作者: 刘启志 宋京翔 王冰 王烈 陈少全
• 来源期刊: 中国现代普通外科进展
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 乙酰肝素酶 MDA-MB-231细胞 转染
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 93-96
• 分类号: R730.2
• 字数: 2725字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9905.2010.02.004

摘要

目的:根据基因库中的人乙酰肝素酶(HPSE)基因序列,构建针对乙酰肝素酶基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用.方法:设计HPSE靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链(共4对),退火后连接入pGPU6/GFP/Neo载体,转化后进行序列鉴定,脂质体转染MDA-MB-231细胞株,免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞蛋白质的表达.结果:设计出4条针对HPSE的siRNA,将退火后的双链寡核苷酸片段克隆到pGPU6/GFP/Neo载体,经过阳性菌落酶切鉴定与测序,结果正确,并通过脂质体转染方法转染到MDA-MB-231细胞株,Western blot检测细胞蛋白质的表达明显降低.结论:成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,转染MDA-MB-231细胞后,HPSE蛋白的表达降低,其中HPSE-A和HPSE-B可明显抑制HPSE的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王烈	南京军区福州总医院普通外科	151	744	13.0	20.0
2	宋京翔	南京军区福州总医院普通外科	31	213	9.0	13.0
3	陈少全	南京军区福州总医院普通外科	37	240	7.0	14.0
4	刘启志	南京军区福州总医院普通外科	5	10	2.0	3.0
5	王冰	南京军区福州总医院普通外科	28	108	3.0	9.0