靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达

• 作者: 傅震 刘宁 尤永平 赵鹏 陆小明 鲁艾林
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: miR-221 RNAi DNA表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 973-977
• 页数: 5页
• 分类号: R331
• 字数: 3466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2009.06.002

摘要

目的 构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响.结果 重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%.结论 成功构建了靶向miR-221的siRNA 表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘宁	南京医科大学附属第一医院神经外科	136	504	11.0	15.0
2	傅震	南京医科大学附属第一医院神经外科	110	506	12.0	15.0
3	尤永平	南京医科大学附属第一医院神经外科	72	306	10.0	14.0
4	赵鹏	南京医科大学附属第一医院神经外科	31	96	7.0	9.0
5	陆小明	南京医科大学附属第一医院神经外科	29	87	6.0	8.0
6	鲁艾林	南京医科大学附属第一医院神经外科	47	160	7.0	9.0