miR-221基因干扰慢病毒载体的构建及其有效靶序列的筛选与表达检测

• 作者: 丁涟沭 孙晓阳 尤永平 王伟杰 蒋健 金孝东
• 来源期刊: 临床神经外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒 DNA表达载体 miR-221
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 128-132
• 分类号: R739.41
• 字数: 3715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-7770.2011.03.06

摘要

目的 构建携带人miR-221 基因的miRNA 干扰慢病毒载体并寻找其有效靶序列,为胶质瘤的研究提供一种新的方法.方法 合成含干扰序列的双链DNA oligo 直接连入酶切后的RNA 干扰载体上.将产物转入细菌感受态细胞,对长出的克隆进行PCR 鉴定,阳性克隆即为目的 基因RNA 干扰慢病毒载体质粒.再将目的 基因与目的 载体分别进行双酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转入细菌感受态细胞,再对PCR 鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确即为融合蛋白过表达质粒载体,然后将两种质粒共转染入293T 细胞,用western bolt 法检测其有效敲减靶序列.结果 重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,共转染后发现编号为PscSI576 的靶点干扰效果最好.结论 本实验成功构建了人miR-221 基因的RNA 干扰慢病毒载体,并找到了有效的干扰靶序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王伟杰		14	97	4.0	9.0
2	丁涟沭		83	529	13.0	19.0
3	尤永平	南京医科大学第一附属医院	72	306	10.0	14.0
4	孙晓阳		58	243	9.0	14.0
5	蒋健		20	91	6.0	8.0
6	金孝东		22	77	5.0	7.0