结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 张振荣 蓝如束 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄海强
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 二重荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 827-834
• 页数: 8页
• 分类号: S852.618|Q503
• 语种: 中文

摘要

根据结核分枝杆菌23 S rRNA基因序列和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计了2对针对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重实时荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行敏感性、特异性测定和临床样品检验.结果显示,该方法特异性好,能区分不同模板浓度组合的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌;可检测到10 copies模板的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌;对保存的50份PPD检测阳性牛的鼻黏液、牛乳和淋巴结进行检测,结果6份结核分枝杆菌阳性,1份牛分枝杆菌阳性,其余均为阴性,与PCR的检测结果一致.由此可见,建立的二重实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、可定量检测等优点,适合用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测.