SUMO表达系统高效、可溶性表达重组鼠源IL-1β

• 作者: 任桂萍 傅俊华 刘生伟 姚文兵 李宁 李德山 谷学佳 郝建权
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: mIL-1β SUMO 融合蛋白 原核表达 MTT 活性检测
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 684-688
• 分类号: Q78
• 字数: 4441字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.08.003

摘要

目的:从LPS刺激过的小鼠胸腺细胞中克隆IL-1β基因,通过原核表达,获得具有生物活性的可溶性鼠源IL-1β蛋白,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础.方法:提取LPS刺激的小鼠胸腺细胞总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-1β序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-1β的编码序列基因,并插入到原核表达载体pHisSUMO express中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pHisSUMO express-mIL-1β.将该载体转化大肠杆菌Rosetta (DE3),IPTG诱导表达mIL-1β/SUMO融合蛋白,Ni-NTA Agarose纯化后,表达产物经SDS-PAGE和 Western blot进行鉴定,用SUMO protease-1切去SUMO标签,经纯化并切去融合标签后获得成熟mIL-1β蛋白.用MTT方法检测目的蛋白对L929细胞的生物学活性.结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致,SDS-PAGE分析表明融合蛋白的相对分子质量为37 kD,切割后的成熟蛋白为17 kD,与理论值相符.且蛋白表达量高,主要以可溶形式存在.Western blot证实该蛋白为mIL-1β.成熟蛋白纯化产物纯度超过95%以上,通过MTT的方法检测证明其具有使L929细胞增殖的作用,从而说明其具有生物学活性.结论:利用大肠杆菌表达系统可高效可溶性表达高纯度的具有生物活性的mIL-1β蛋白.