人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究

• 作者: 刘玉华 孙杰 徐耀瑜 杜阳阳 胡玲玲 邱玉华 郭静雅 陈昌友 陈明心 陈永井
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CXCR3 趋化因子 基因转染 逆转录病毒 稳定表达
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 387-391
• 分类号: R392.11
• 字数: 3829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.05.001.

摘要

目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应.方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR 扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500 μg/ml zeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3.采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定.Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率.结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig 10 ng/ml、IP-10 5 ng/ml及I-TAC 1 ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%.结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础.