实时定量PCR检测siRNA对小鼠巨噬细胞中FTH1基因表达的抑制作用

• 作者: 唐利燕 杜军伟 王远志 葛阳春 陈创夫
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 实时定量PCR siRNA 小鼠RAW264.7巨噬细胞 FTH1
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 638-641
• 分类号: R378.5
• 字数: 2367字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.07.006

摘要

目的 通过实时定量 PCR(real-time PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(siRNA)抑制目的 基因表达的方法.方法 化学设计合成对应于FTH1 (ferritin heavy chain 1, FTH1)基因表达mRNA的siRNA,经TurboFectTM in vitro Transfection Reagent转染小鼠RAW264.7巨噬细胞,48h后,提取总RNA,逆转录为cDNA.以3-磷酸甘油醛脱氢酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,定量检测FTH1的表达,比较干扰前后FTH1基因mRNA的量.结果 3种siRNA处理的小鼠巨噬细胞中FTH1基因的表达抑制率最高为97.60%.结论 实时定量PCR方法的建立为研究布鲁氏菌在侵染巨噬细胞过程中FTH1的功能提供了有效途径.