狂犬病病毒修饰基因组的构建

• 作者: 易忠 朱晶晶 王海烽 符子华 简子健 胡尔玛西 马素贞 魏婕 魏玉荣
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 胞质区 Ψ区 同源重组 人细胞色素C基因 反向遗传学
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 1236-1241
• 分类号: S118|S851.655
• 字数: 3396字
• 语种: 中文

摘要

[目的]利用反向遗传学技术在DNA水平上构建了狂犬病病毒修饰基因组.[方法]提取狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)口服疫苗株SRV9基因组总RNA作为RT-PCR的扩增模板,并根据GenBank已发表的SRV9基因组序列设计引物, 缺失狂犬病基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,再设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区).缺失Ψ区及删除CD区时采用基因同源重组的方法进行.在缺失的Ψ区插入人细胞色素C基因时,利用引物引入酶切位点NheI和EcoRI, 用PCR扩增出人细胞色素C基因并插入NheI和EcoRI位点.[结果]获得含预期的人细胞色素C基因,同时缺失了CD区与Ψ区的质粒pBSK- LA.[结论]全基因组测序结果表明已成功构建了狂犬病病毒修饰基因组.