FGF21[Tyr20]突变体的克隆、表达及纯化

• 作者: 万晓珊 刘敏 孔祥鑫 张耀方 李校堃 杨苹 王会岩 赵宏鑫 邵明龙
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 成纤维细胞生长因子21[Tyr20]突变体基因 克隆,分子 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 1088-1093
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测.方法 以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合,克隆至pET22b表达载体中,构建重组原核表达质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20],克隆至BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blotting法进行鉴定,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,SUMO蛋白酶将SUMO切除,Sephadex G-50除盐.结果 通过PCR定点突变,成功地将FGF21第20位氨基酸进行了突变,重组质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20]经PCR和双酶切鉴定后测序与预期结果相符.经SDS-PAGE电泳分析,蛋白为可溶性,纯化后成功获得FGF21[Tyr20]突变体蛋白,Western blotting分析显示FGF21[Tyr20]突变体蛋白与FGF21抗体有特异性反应.结论 成功构建并高效可溶性表达SUMO-FGF21[Tyr20]的突变体基因,获得FGF21[Tyr20]蛋白.