死亡相关蛋白激酶C末端对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究

• 作者: 刘慧明 张海涛 汪亚君 范大华 陈小谊
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 死亡相关蛋白激酶 基因疗法 谷氨酸 细胞凋亡 DNA降解,坏死
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 839-844
• 分类号: R394.114
• 语种: 中文

摘要

目的 观察死亡相关蛋白激酶(DAPK)蛋白C-末端多肽(DCTP)对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用,探讨DCTP抑制DAPK功能的机制.方法 采用PCR法扩增DCTP核酸片段,定向连接至质粒pEGFPN1、pIRES2-EGFP和pcDNA3.1(-),将重组质粒[pEGFPN1-DCTP、pIRES2-DCTP-EGFP和pcDNA3.1(-)-DCTP]转染至SH-SY5Y细胞中,筛选稳定细胞株.分析pEGFPN1-DCTP的表达产物在细胞中的定位.建立稳定表达DCTP的SH-SY5Y细胞.用MTT法、Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞对谷氨酸的敏感性,用Western blotting检测细胞内DAPK的表达量以及磷酸化DAPK(p-DAPK)水平的变化.结果 谷氨酸对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用具有浓度依赖性,40mmol/L的谷氨酸对细胞的抑制率为51.7%.流式细胞仪检测结果显示,40mmol/L谷氨酸处理后细胞的凋亡率和坏死率分别为26.1%和27.7%,而正常培养细胞分别为0.08%和0%.谷氨酸诱导细胞凋亡时,p-DAPK表达下降.荧光显微镜观察可见DCTP定位于细胞质.用40mmol/L谷氨酸分别诱导转染pcDNA3.1(-)-DCTP和pcDNA3.1(-)质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞,流式细胞仪检测结果显示,前者凋亡率为43.7%,而后者凋亡率为62.2%.Western blotting检测结果显示,在谷氨酸诱导下,与转染pIRES2-EGFP质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞相比,转染pIRES2-DCTP-EGFP质粒的细胞内DAPK和p-DAPK水平均无明显变化.结论 DCTP基因的表达产物定位于SH-SY5Y胞质.DCTP可以抵抗谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡,但并不影响DAPK的磷酸化及其表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘慧明	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	19	146	5.0	12.0
2	张海涛	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	64	399	11.0	16.0
3	汪亚君	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	18	122	5.0	10.0
4	陈小谊	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	4	13	2.0	3.0
5	范大华	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	1	1	1.0	1.0