利用RNA干扰技术沉默p53基因突变子175H的效果评价

• 作者: 刘扬 刘晓冬 孔德娟 易贺庆 焦本蒸 赵广通 马淑梅 高琳
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 p53 突变子 基因沉默
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 220-224
• 分类号: R342.2|Q754
• 语种: 中文

摘要

目的:在p53基因缺失型细胞株H1299中转染p53基因突变子175H,构建H1299-175H细胞模型,并观察小发夹环RNA(shRNA)的基因沉默效果.方法: 采用引物重叠PCR定点突变技术合成p53基因突变子175H,并利用基因重组技术构建出表达载体,以脂质体转染法建立细胞模型;合成针对p53-175H的shRNA 并构建出反转录病毒表达载体Psupe-175HR,应用磷酸钙共沉淀法导入包装293T细胞,并收集假病毒颗粒感染H1299细胞.应用Western blotting法检测P53蛋白表达.结果:转染p53基因突变子175H的H1299-175H细胞模型P53蛋白表达阳性;H1299-175H细胞模型转染shRNA后,P53蛋白表达下调.结论:成功构建H1299-175H细胞模型;构建的Psuper-175HR基因沉默载体可以有效地抑制p53基因突变子175H的表达.