HCT116-p53-/-细胞中p53基因突变子模型的建立

• 作者: 刘扬 刘晓冬 吴丽珉 张洁琼 施丹 易贺庆 汪海娇 马淑梅
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因,p53 转染 定点诱变 Western blotting
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 713-716
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的:合成p53基因突变子及构建真核表达载体,并在HCT116-p53-/-细胞中建立248W和273H突变子表达模型,为研究p53突变子在肿瘤发生中的作用及通过封闭p53突变子的方法进行肿瘤基因治疗提供实验基础.方法:以野生型p53基因为模板,采用引物重叠PCR定点突变技术,合成p53基因248W和273H突变子,并利用基因重组技术构建出表达载体,用脂质体转染法建立模型,Western blotting检测p53突变子蛋白.结果:经基因测序后证实第248位密码子由精氨酸(CGG)突变为色氨酸(TGG),第273位密码子由精氨酸(CGT)突变为组氨酸(CAT),说明成功合成p53突变子,构建的表达载体转染HCT116细胞后,经Western blotting检测,以特异表达条带与内参GAPDH的比值做为相对值进行半定量比较,特异蛋白表达显著升高,证实模型建立成功.结论:通过引物重叠PCR定点突变技术成功构建p53基因248W和273H突变子,并在HCT116细胞中成功表达.