人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的方法探讨

• 作者: 冯年花 娄远蕾 杨阳 汪泱 潘长福 谢安 邓志锋 郭菲 阮琼芳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 诱导性多能干细胞 神经干细胞 维甲酸 人类
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1662-1664
• 分类号: Q813|R318
• 字数: 3060字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2010.044

摘要

目的:探讨人诱导性多能干细胞(iPS细胞)体外定向分化为神经干细胞(NSCs)的方法.方法:人iPS细胞悬浮培养4 d形成的拟胚体(EB)经维甲酸(RA)诱导4 d,诱导后的EB在无血清培养基中筛选并扩增培养.倒置显微镜下观察诱导后细胞的形态变化,RT-PCR检测iPS细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达,免疫荧光法检测NSCs特异性标志物Nestin、神经元标志物β-tubulinⅢ和神经胶质细胞标志物GFAP的表达.结果:(1)人iPS细胞在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性基因Nanog、Oct4和Sox2,去除饲养层后悬浮培养能形成球形EB;(2)经RA诱导后的EB在无血清培养基中筛选培养第1 d贴壁生长,周围爬出细胞;第3 d,在高倍镜下可见中央聚集的细胞呈环形的rosette结构,rosette结构增多到第7 d达高峰.对照组未观察到rosette结构.随后大部分rosette细胞脱离瓶壁悬浮生长,形成神经球样克隆.免疫荧光显示神经球呈nestin阳性表达.贴壁培养的神经球能分化成β-tubulin Ⅲ和GFAP阳性细胞.结论:RA诱导结合无血清培养基筛选法能诱导iPS细胞高效分化为NSCs.