PKD1对HeLa 细胞中AP1的转录激活作用

• 作者: 冯丽 柯志勇 许万福 邓凡 邹志鹏
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白激酶D1 AP1 siRNA 转录激活
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 页码范围: 1945-1947
• 分类号: R329.28
• 字数: 2340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2010.15.004

摘要

目的 研究蛋白激酶D1(PKD1)对人HeLa细胞中AP1转录激活作用,为探讨PKD1作用的AP1靶基因的功能作用奠定基础.方法 首先将对照质粒pcDNA3.1、PKD1野生型质粒(pcDNA-PKD1)或无激酶活性突变型质粒pcDNA-PKD1-DN与AP1转录活性报告质粒pAP1-luc及内参照报告质粒pRL-SV40共转染人HeLa细胞,同时将对照siRNA(si-CTL)或PKD1 siRNA(siRNA-PKD1)与AP1转录活性报告质粒pAP1-luc及内参照报告质粒pRL-SV40也共转染人HeLa细胞.转染48 h后,分别收集细胞裂解液进行Western blot 检测外源性PKD1过表达或内源性PKD1敲低状况,并以Promega双报告基因分析试剂盒测定AP1荧光素酶活性,计算AP1相对转录活性.结果 Western blot证实HeLa细胞中外源性pcDNA-PKD1、pcDNA-PKD1-DN过表达,而且siRNA-PKD1明显敲低HeLa细胞中内源性PKD1表达;双色荧光素酶报告基因检测表明,与对照质粒pcDNA3.1比较,pcDNA-PKD1过表达明显增强AP1转录活性(P<0.05),相反,与pcDNA-PKD1比较,pcDNA-PKD1-DN过表达则明显降低AP1转录活性(P<0.05).与之相符,与si-CTL比较,siRNA-PKD1对内源性PKD1敲低,也明显抑制AP1转录活性(P<0.01).结论 PKD1表达和激酶活性增强HeLa细胞中AP1转录激活,提示PKD1 可能通过AP1调控相关靶基因表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柯志勇	南方医科大学细胞生物学教研室	15	37	4.0	5.0
2	邹志鹏	南方医科大学细胞生物学教研室	13	18	3.0	4.0
3	许万福	南方医科大学细胞生物学教研室	4	22	1.0	4.0
4	冯丽	南方医科大学细胞生物学教研室	3	4	1.0	2.0
5	邓凡	南方医科大学细胞生物学教研室	12	10	2.0	2.0