环介导等温扩增技术(LAMP)检测棘球绦虫感染犬粪DNA的研究

• 作者: 古力帕丽·麦曼提依明 吾拉木·马木提 陈洁 陈璐
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 环介导等温扩增 棘球绦虫 Cox1基因 检测
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1011-1015
• 分类号: R383.2
• 字数: 3805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.11.015

摘要

目的 建立快速检测棘球绦虫感染犬粪便的DNA检测方法一环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP).方法 针对细粒棘球绦虫线粒体DNA Cox1基因6个位点特异性的设计4条LAMP引物,利用LAMP法和普通PCR方法同时检测棘球绦虫、肥胖带绦虫以及犬肠道内包括犬蛔虫和泡状带绦虫的DNA来验证LAMP方法的特异性；将转入Cox1基因片段的质粒作为标准阳性对照,并做系列10倍稀释同时用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者的敏感性.此外,运用LAMP法检测13份犬粪DNA样本.LAMP扩增结果通过肉眼、电泳和酶切来鉴定.结果 以棘球绦虫DNA为模板的反应体系出现LAMP扩增反应产物,其它寄生虫和肥胖带绦虫没有出现LAMP扩增反应产物.LAMP检测Cox1基因的敏感性比普通PCR高出10倍,用于8只人工感染的犬检测结果均为阳性,而5只健康犬为阴性.结论 初步建立一种特异、敏感检测棘球绦虫感染犬的快速检测方法,不需要PCR仪、凝胶成像仪等昂贵的设备和电泳观察步骤,适于包虫病流行区和基层动物医院棘球绦虫感染犬的检测.