禾谷镰孢菌β-微管蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达

• 作者: 于俊杰 周明国 张聪 徐建强 王建新 陈长军
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禾谷镰孢菌 β-微管蛋白基因 原核表达 纯化 Western-blot
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 51-56
• 分类号: S432.1
• 字数: 4302字
• 语种: 中文

摘要

分别扩增了禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)对多菌灵(MBC)敏感菌株(MBCs)的β1-微管蛋白基因(β1-S)和β2-微管蛋白基因(β2-S),及多菌灵中抗菌株(MBCmr)和高抗菌株(MBChr)的β2-微管蛋白基因(β2-MR和β2-HR),测序正确后连接到pET32a(+)原核表达载体上,转化至大肠杆菌Rosepta感受态中,经IPTG(1 mmol·L-1)诱导,得到了N末端融合6xHis纯化标签的表达产物.SDS-PAGE电泳分析表明:在大肠杆菌中表达了相对分子质量约68×103的蛋白,和预测蛋白大小一致,表达的产物主要以包涵体的形式存在.表达的蛋白经HisTrapTM HP Columns纯化并做了Western-blot验证,结果表明,该蛋白能与抗His标签的单抗发生特异性反应.