少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析

• 作者: 乔军 孟庆玲 才学鹏 王熙凤 贡莎莎 钟文强 陈英 黄运福
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 少孢节丛孢菌 几丁质酶AO-379 克隆 分子特征 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 148-154
• 页数: 7页
• 分类号: S853.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.01.24

摘要

[目的]深入了解捕食线虫性真菌几丁质酶的生物学功能,为今后以少孢节丛孢菌重组几丁质酶AO-379研发线虫病生物防控制剂打下基础.[方法]克隆少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-379基因的全长序列,利用Signal P4.1 Server、InterPro、ExPASy等在线分析软件对其进行生物信息学分析;构建重组表达载体pET32a-AO-379,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白.[结果]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379基因全长1475bp,含有1个1203bp的开放阅读框(ORF),编码400个氨基酸.几丁质酶AO-379基因序列与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)几丁质酶基因序列的同源性为97.08%,其推导氨基酸的同源性为98.75%.几丁质酶A0-379属于糖苷水解酶18家族,具有SXGG和VDGFDLDFE两个催化区保守序列.其中,SLGGS位于第127~131位,为底物结合位点;VDGFDLDFE位于第173~181位,为水解酶催化活性位点.经大肠杆菌诱导表达获得的融合蛋白AO-379相对分子质量为60.0kD,且能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应.[结论]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白AO-379能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应,可用于研发线虫病生物防控制剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	才学鹏		141	790	15.0	21.0
2	乔军	石河子大学动物科技学院	103	346	8.0	14.0
3	孟庆玲	石河子大学动物科技学院	77	254	7.0	13.0
4	陈英	石河子大学动物科技学院	17	74	5.0	8.0
5	王熙凤	石河子大学动物科技学院	8	5	1.0	1.0
6	钟文强	石河子大学动物科技学院	10	4	1.0	1.0
7	贡莎莎	石河子大学动物科技学院	18	18	2.0	3.0
8	黄运福	石河子大学动物科技学院	8	6	1.0	1.0