少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶基因AO-190的克隆、表达及其酶活性的测定

• 作者: 乔军 孟庆玲 张国武 才学鹏 贡莎莎 钟文强 陈英 黄运福
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 少孢节丛孢菌 几丁质酶 原核表达 蛋白纯化 酶活性
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 页码范围: 67-74
• 页数: 8页
• 分类号: Q78|S432.4
• 字数: 5172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.04.010

摘要

捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌在侵染线虫的过程中分泌几丁质酶,为了弄清少孢节丛孢菌几丁质酶基因AO-190的分子特征和功能,对少孢节丛孢菌新疆分离株XJ-A1几丁质酶AO-190进行克隆及分子特征分析,构建原核表达载体pET32a-AO-190进行表达,并利用镍柱纯化技术纯化重组几丁质酶后,使用几丁质酶ELISA检测试剂盒测定酶活性.结果显示,XJ-A1几丁质酶AO-190基因全长1574 bp,有4个内含子序列,序列中包含1个1251 bp的开放阅读框(ORF),编码416个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-190基因序列的同源性为93.33％,氨基酸序列的同源性为92.55％;有信号肽以及1个精氨酸富集区、1个双向核定位信号、1个N-糖基化位点、4个PKC磷酸化位点、6个N-酰基化位点、8个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酰胺化位点、1个低复杂度区,且含有糖苷水解酶18家族几丁质酶保守的底物结合位点SLGG和催化活性位点VDGVDLDLE,属于糖苷水解酶18家族几丁质酶;其二级结构元件有无规则卷曲、α螺旋和β折叠,三级结构为(α/β)8圆桶形结构;系统进化分析表明,AO-190与能产生短柄黏球的Dactylellina haptotyla的几丁质酶(EPS43772.1)以及能产生收缩环的Drechslerella stenobrocha(EWC46603.1)几丁质酶亲缘关系最接近,与昆虫和脊椎动物的几丁质酶存在显著的进化距离;经SDS-PAGE和Western Blot分析,原核表达获得的重组蛋白酶分子量约为63 ku,与预期大小一致,且能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生特异性血清学反应;几丁质酶酶联免疫分析(ELISA)检测,经镍柱纯化技术纯化后的重组几丁质酶活性浓度为222 IU/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	才学鹏		141	790	15.0	21.0
2	乔军	石河子大学动物科技学院	103	346	8.0	14.0
3	孟庆玲	石河子大学动物科技学院	77	254	7.0	13.0
4	陈英	石河子大学动物科技学院	17	74	5.0	8.0
5	钟文强	石河子大学动物科技学院	10	4	1.0	1.0
6	贡莎莎	石河子大学动物科技学院	18	18	2.0	3.0
7	黄运福	石河子大学动物科技学院	8	6	1.0	1.0
8	张国武	石河子大学动物科技学院	5	3	1.0	1.0