少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶 P186基因的克隆、序列分析及表达

• 作者: 乔军 孟庆玲 才学鹏 王国超 胡政香 谢堃 赵海龙 陈双庆
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 少孢节丛孢菌 丝氨酸蛋白酶P186 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 93-97
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3410字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因序列设计特异性引物，运用RT-PCR扩增获得目的基因片段，构建重组表达质粒pET32a-P186，转化到大肠杆菌BL21（DE3），以IPTG进行了诱导表达。结果表明，P186基因cDNA全长为1224 bp，编码407个氨基酸，其中第1～21位为信号肽序列，氨基酸序列的第156～167位、192～202位、343～353位分别是天冬氨酸（Asp160）、组氨酸（His192）、丝氨酸（Ser345）活性位点所在区域，属于Subtilase家族，包括2个潜在的N-联糖基化位点（ Asn249、Asn342）及与底物结合的S1区（ SBP） Ser251 Ile252 Gly253和Ala277 Ala278 Gly279。SDS-PAGE分析结果显示，表达产物的分子质量约为62 kDa。 Western Blot 分析结果表明，P186重组蛋白可以与抗蛋白粗提液多克隆抗体发生反应。为了揭示少孢节丛孢菌捕食线虫的分子机制，首次克隆并表达了少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因，为进一步研究丝氨酸蛋白酶P186的生物学功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乔军	石河子大学动物科技学院	103	346	8.0	14.0
2	孟庆玲	石河子大学动物科技学院	77	254	7.0	13.0
3	胡政香	石河子大学动物科技学院	9	33	4.0	5.0
4	陈双庆	石河子大学动物科技学院	4	12	3.0	3.0
5	赵海龙	石河子大学动物科技学院	7	33	3.0	5.0
6	王国超	石河子大学动物科技学院	8	22	3.0	4.0
7	谢堃	石河子大学动物科技学院	4	5	2.0	2.0