暗黑鳃金龟几丁质酶基因的克隆、表达及活性分析

• 作者: 张雅昆 徐大庆 赵丹 邹爽 郭巍
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 暗黑鳃金龟 cDNA表达文库 几丁质酶 真核表达系统 活性分析
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 91-94,105
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2014.0147

摘要

本研究通过免疫筛选暗黑鳃金龟幼虫中肠cDNA表达文库,获得其几丁质酶基因Hpchi.序列分析表明Hpchi开放阅读框长1 443 bp,编码480个氨基酸,预测分子量为51.4 kDa.Hpchi蛋白N-端带有18个氨基酸的信号肽,C-端存在有一个几丁质结合结构域,催化区位置显示有特异活性位点,判定Hpchi蛋白属于Ⅰ型的几丁质酶.分别构建原核和真核表达载体,转化到大肠杆菌BL21和昆虫细胞系sf9,BTI-Tn-5BI-4(Highfive)中进行表达.SDS-PAGE和Western Bolt杂交试验显示,Hpchi重组蛋白在大肠杆菌及昆虫细胞系中都获得了成功表达.酶活分析表明真核表达的Hpchi重组蛋白具有几丁质酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐大庆	河北农业大学生命科学学院	19	425	6.0	19.0
2	邹爽	河北农业大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
3	张雅昆	河北农业大学生命科学学院	6	20	2.0	4.0