一种新的快速鉴定蛋白与靶DNA结合位点的方法

• 作者: 张宪省 徐兆师 朱明 李连城 陈明 马有志 魏伟
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: DNA酶I足迹法 EMSA 毛细管电泳 蛋白与DNA互作
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 2167-2172
• 分类号: S1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.02167

摘要

DREB转录因子在植物逆境胁迫响应中起非常重要的作用,对植物的生长发育起重要的调控作用.传统的DNA酶I足迹法应用同位素标记DNA,采用序列胶分离DNaseI酶切片段,操作较复杂,分辨率较低,不适用于高通量的样品检测.为阐明植物体内DREB转录因子的调控机制,本研究利用改进的DNA酶I足迹法(DNaseIfoot-printing)结合凝胶阻滞法(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA),选用荧光色素代替同位素标记,毛细管电泳技术代替序列胶检测DNaseI酶切片段,判定GmMYB1蛋白与GmDREB3启动子DNA结合的区域.采用限制性内切酶酶切GmDREB3启动子DNA验证以上结果.同时,在判定的GmMYB1结合区域的基础上,选择可能的DNA结合元件与GmMYB1进行EMSA试验,证明GmMYB1可以与相应元件结合.该方法比传统的DNA酶I足迹法快速、简便、准确并可靠,作为一种高通量的鉴定方法可用于大规模鉴定蛋白质的DNA结合位点.