烟草T-DNA插入位点侧翼序列扩增方法的筛选与优化

• 作者: 刘峰 刘慧 刘贯山 崔萌萌 张雪峰 王元英 路铁刚 龚达平
• 来源期刊: 中国烟草科学
• 关键词: 烟草 T-DNA 插入位点 侧翼序列 筛选
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 96-101,107
• 页数: 7页
• 分类号: TS413
• 语种: 中文
• DOI: 10.13496/j.issn.1007-5119.2014.01.018

摘要

烟草T-DNA激活标签插入突变体库的创制过程中，需要进行大量的T-DNA插入位点的侧翼序列扩增，因此选择一种适用于烟草T-DNA侧翼序列扩增的高效方法尤为必要。本研究比较了TAIL-PCR、PCR-walking、FPNI-PCR三种方法对T-DNA插入位点侧翼序列的扩增效率、插入位点确定的比例和同源蛋白比对结果，并对3种方法的PCR程序、体系和引物设计等方面进行了优化，确定TAIL-PCR更适合烟草的侧翼序列扩增，通过产率、条带长度、插入位点和同源蛋白比对结果的比较，得出TAIL-PCR更适合烟草的侧翼序列扩增。这一结果为应用烟草突变体开展烟草基因功能的研究奠定了基础。