高效、新T-DNA侧翼序列分离技术——Actail-PCR

• 作者: 刘灶长 周立国 杨立勇 罗利军 罗华程
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: T-DNA 侧翼序列 TAIL-PCR Actail-PCR
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1447-1451
• 页数: 5页
• 分类号: S1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.040

摘要

[目的]建立一种有效分离T-DNA插入突变体侧翼基因组序列的方法.[方法]分离侧翼的目标基因组序列是利用T-DNA标签法研究植物功能基因组学的一个关键步骤,笔者发展稳定高效的Actail-PCR分高技术.该技术一侧引物来自于T-DNA载体,另一侧引物为一个复性控制引物.复性控制引物在3'端为一个14 bp的随机简并引物,在5'端非目标尾部序列接上一个通用引物,中间由5个多聚脱氧次黄嘌呤核苷(poly(d1))连接.[结果]Actail-PCR技术将随机简并引物重新编辑成复性控制引物,在40℃的低严谨条件下,3'端的随机简并引物可以与T-DNA插入突变体的侧翼目标区段随机的结合,扩增得到目标片段,随后利用5'端的通用引物与T-DNA载体上的巢式引物依次组合,在65℃(10个循环后逐步降温至58℃)的高严谨条件下逐步扩增特异片段,同时抑制非特异性扩增,可以显著提高目标片段的扩增效率,减少假阳性.[结论]相对传统的TAIL-PCR,Actail-PCR技术可以更高效地分离T-DNA插入突变体的侧翼基因组序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周立国		3	74	3.0	3.0
2	罗华程		2	15	2.0	2.0