转GmWRKY70基因大豆的PCR检测及其T-DNA侧翼序列分析

• 作者: 操晶 朱丹华 杨清华 梅娜 胡兴旺 董德坤 陈芬
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆转基因株系 GmWRKY70 高效热不对称交错PCR(Hi-TAILPCR) T-DNA
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1203-1210
• 页数: 8页
• 分类号: S565.1
• 字数: 5359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.07.006

摘要

对转基因株系的PCR检测以及对T-DNA侧翼基因组序列的深入分析,可以充分了解转基因株系的特异性分子特征.本研究利用农杆菌(Agrobacterium)介导的大豆(Glycine max)子叶转化方法,获得了3个转GmWRKY70基因的大豆株系.本研究对除草剂抗性基因(bialaphos resistance,Bar)、目标基因GmWRKY70以及载体构建特异性片段进行PCR检测,利用高效热不对称交错PCR(high-efficient thermal asymmetric interlaced PCR,Hi-TAIL PCR)对T-DNA侧翼序列进行整合位点分析.结果表明,3个转GmWRKY70基因的大豆株系均为阳性株系.T-DNA在43119699～43119712 bp之间反向整合到大豆染色体Chr07中.T-DNA整合导致大豆染色体Chr07插入位点12 bp缺失.对于引入的T-DNA,发现左边界(left border,LB)的80 bp序列和右边界(right border,RB)的22 bp序列被截短.在导入的LB端和大豆基因组DNA的整合位点上发现了两个碱基对的微同源性,而RB未发现同源性.本研究设计新的整合位点特异性引物,并验证这种转化事件,为促进分子辅助选择在育种计划中的应用提供了资料基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱丹华	浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所	61	322	10.0	14.0
2	董德坤	浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所	23	92	6.0	8.0
3	胡兴旺	浙江师范大学化学与生命科学学院	2	7	1.0	2.0
4	杨清华	浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所	17	53	4.0	6.0
5	操晶	长江大学园艺园林学院	1	0	0.0	0.0
6	梅娜	长江大学园艺园林学院	1	0	0.0	0.0
7	陈芬	浙江师范大学化学与生命科学学院	1	0	0.0	0.0