高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CD4+T细胞表位优势区的鉴定

• 作者: 侯凤香 侯继波 方剑玉 王琳 郑其升 郭小参 陈溥言 陶红梅
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白 T细胞表位 表位优势区
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 107-112
• 分类号: S852.4+3
• 字数: 4262字
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)临床分离株的M基因(525 bp),通过设计4对引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分别扩增相应基因M1、K1、K2、K3和K4,连接pET-32a(+)表达载体,经鉴定后转化Escherichia coli BL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果显示,分别在相对分子质量30.8×103和24.4×103位置出现目的条带,重组蛋白均可与阳性血清发生特异反应.将蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2周后从小鼠脾脏分离淋巴细胞,分别用K1、K2、K3、K4蛋白进行体外刺激.流式细胞仪检测分泌IFN-γ细胞因子的T细胞的频率,K1蛋白刺激组显著高于其他组和对照组(P≤0.01).结论:M1蛋白K1(78-112)段为T细胞表位优势区.