葎草花粉主要变应原核酸疫苗pcDNA3.1-LC2的真核细胞表达和免疫分析

• 作者: 刘昀 卢家美 吴媛媛 孙秀珍 张永红 徐晶 李满祥
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 支气管哮喘 葎草花粉变应原 核酸疫苗 真核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 155-160,174
• 分类号: R562.1
• 语种: 中文

摘要

目的 验证葎草花粉主要变应原核酸疫苗(pcDNA3.1-LC2)能否在真核细胞内表达,并进行免疫原性、免疫保护作用、安全性等分析.方法 应用磷酸钙沉淀法将pcDNA3.1-LC2转染至HEK293细胞,提取RNA并行RT-PCR,利用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,验证所分离出的条带与目的 片段是否一致;应用pcDNA3.1-LC2免疫正常小鼠,ELISA方法测定血清中IgG、IgE浓度和脾组织匀浆中IL-4、IFN-γ浓度;制备葎草花粉变应性哮喘小鼠模型,应用pcDNA3.1-LC2对葎草花粉变应性哮喘模型小鼠进行免疫治疗,行肺泡灌洗液沉渣细胞计数,肺泡灌洗液沉渣滴片瑞士染色并嗜酸性粒细胞分类计数;取左肺上叶行肺脏病理HE染色,ELISA方法测定肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ浓度,并测定血清中IgG、IgE浓度.结果 琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,于750bp处分离出一明显的条带,与目的 片段一致;采用pcDNA3.1-LC2免疫正常小鼠后,血清IgG浓度升高,IgE浓度无明显变化,脾组织匀浆中IL-4浓度降低,IFN-γ浓度升高;免疫过程中未引起过敏反应、免疫损伤及急性肺损伤;应用该核酸疫苗免疫葎草花粉变应性哮喘小鼠模型,可明显降低气道炎症级别、减轻炎症细胞浸润、降低嗜酸性粒细胞百分比,引起血清中IgG浓度升高和IgE浓度降低,肺泡灌洗液中IL-4浓度降低和IFN-γ浓度升高,再次激发时哮喘症状明显减轻.结论 pcDNA3.1-LC2可在真核细胞内表达,诱导TH1/TH2平衡向TH1方向转化,具有免疫原性及免疫保护作用,安全性较好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘昀	西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科	60	271	9.0	12.0
2	李满祥	西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科	44	232	7.0	13.0
3	孙秀珍	西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科	76	424	11.0	16.0
4	卢家美	西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科	15	71	5.0	7.0
5	吴媛媛	西安交通大学医学院第二附属医院	16	37	3.0	4.0
6	张永红	西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科	18	67	4.0	7.0
7	徐晶	西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科	9	27	2.0	4.0