抗H5N1禽流感病毒VHH抗体库的构建

• 作者: 严安 包文静 吴标 夏立亮 孙冰玉 孙志伟 熊慧 王颖 赵国屏 车小燕 金维荣
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: H5N1 噬菌体抗体库 重链可变区抗体 禽流感病毒
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 44-49
• 分类号: R392.11
• 字数: 4885字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.01.011

摘要

目的:构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链可变区抗体库(VHH型抗体库),为抗H5N1的VHH抗体筛选奠定基础.方法:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼,一定免疫时间后测定小羊驼外周血清中抗体中和活性,分离其外周淋巴细胞,利用RT-PCR方法得到VHH抗体片段.通过优化连接和电转化方法,将足量VHH片段与pCANTAB5E连接后电转入大肠杆菌TG1,获得VHH抗体基因库;检测基因库库容以及多样性,并采用血凝抑制试验对噬菌体抗体库进行初步功能性鉴定.结果:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼四次后,其外周血清中抗体血清抑制效价可达1∶2 560,构建的VHH抗体基因库库容可达3×108,随机挑选14个抗体基因克隆进行测序鉴定,结果显示均为独立克隆,表明所建抗体库多样性好.上述基因库经辅助噬菌体拯救后,得到抗H5N1的噬菌体VHH型抗体初级库,对初级库进行血凝抑制试验,结果呈阳性,表明初级库中存在具有潜在中和活性的抗H5N1抗体.结论:结果表明,已成功构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链抗体库,为进一步筛选抗H5N1禽流感的重链抗体打下良好基础,并为H5N1的早期临床诊断和治疗提供新的手段.