抗Aβ42细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B的构建

• 作者: 吴江 孙欣 李超 杨宇 杨广笑 杨弋 王全颖 王旭 王明宇 车丽赫
• 来源期刊: 中风与神经疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 细胞内抗体 scFv Aβ
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著与经验总结
• 页码范围: 388-391
• 页数: 4页
• 分类号: R749.1+6
• 字数: 3284字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建能够在细胞内特异性拮抗Aβ42的小分子细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B,为细胞内抗体技术用于AD的诊断和治疗提供新依据.方法 根据GenBank提供的Aβ42单克隆抗体的已知序列,选取重链和轻链可变区(CDR1和CDR3)进行偶联,应用DNASIS计算机软件设计引物,通过两次PCR获得目的 片段mAbA/B.将目的 片段与pGEM-Teasy载体相连,限制性内切酶酶切鉴定重组质粒,Sanger单链末端终止法测出克隆的核苷酸序列.结果 限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-T Easy/mAbA/B,可见132bp或141bp的目的 片段,与理论值一致;DNASIS软件分析测序结果与GenBank所报道的结果完全一致.限制性内切酶PamHI和BamH I联合酶切pssHG-CMV/TAT-6His-mAbA/B,琼脂糖凝胶电泳鉴定重组质粒,得到大小约为400bp的融合基因TAT-6His-mAbA/B目的 片段,与理论值一致.结论 通过PCR方法成功克隆了Aβ42小分子细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B片段.