His-TAT-mCherry融合蛋白的跨膜转导及其在细胞内的定位

• 作者: 刘亚伟 姜勇 宋方丽 杨勤 陈茜
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因产物,tat 红色荧光蛋白 跨膜转导
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 147-150
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.02.007

摘要

目的 构建在原核中表达的人类免疫缺陷病毒转录活化因子(HIV-TAT)红色荧光蛋白(mCherry)融合表达载体,荧光显微镜观察HW-TAT的跨膜转导及其在细胞内的定位,为进一步研究HW-TAT的跨膜转导机制及其定位提供重要工具. 方法 采用基因重组技术构建含HIV-TAT以及红色荧光蛋白的质粒pET14b-His-TAT-mCherry,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,将该质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使其在体外表达,并进行纯化、除菌.将纯化的His-TAT-mCherry融合蛋白与Hela细胞共同孵育,荧光显微镜下观察. 结果 PCR、双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;表达纯化出了高纯度的His-TAT-mCher-ry融合蛋白.荧光显微镜下见Hela细胞中红色荧光蛋白主要分布在胞质中,细胞膜上也有一定分布. 结论 成功构建了pET14b-His-TAT-mCherry原核表达质粒,纯化了高纯度的His-TAT-mCherry融合蛋白,该蛋白在哺乳动物细胞中有跨膜转导活性,为研究HIV-TAT的跨膜转导机制提供了一个重要的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘亚伟	南方医科大学病理生理教研室	44	244	9.0	13.0
2	姜勇	南方医科大学病理生理教研室	72	377	8.0	17.0
3	杨勤	贵阳医学院病理生理教研室	109	702	14.0	18.0
4	陈茜	贵阳医学院病理生理教研室	5	43	3.0	5.0
5	宋方丽	南方医科大学病理生理教研室	2	4	1.0	2.0