Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性

• 作者: 于欣 佟海滨 关新刚 孙新 苏维恒
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Tat-GFP 细胞穿膜肽 融合蛋白 穿膜活性
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 725-728
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140406

摘要

目的：获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白（GFP）标记的 Tat-GFP 融合蛋白，探讨 Tat-GFP 在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法：应用 pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌 BL21感受态细胞，检测不同异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）浓度（0.5和1.0 mmol·L-1）和不同温度（22℃和37℃）诱导融合蛋白的表达情况；利用 Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白，利用 GFP特异性抗体采用 Western blotting法分析洗脱液中的蛋白；激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP融合蛋白的跨膜转运活性。结果：0.5和1.0 mmol· L-1 IPTG诱导出的细菌总蛋白中所含的 Tat-GFP蛋白量无明显差异；低温（22℃）诱导生产的 Tat-GFP蛋白量较37℃更高；Western blotting分析，GFP抗体能够特异性识别PVDF膜上的蛋白，条带灰度与Tat-GFP蛋白上样量有关联；细胞穿膜实验，绿色荧光分布于 MCF-7细胞的细胞质和细胞核中。结论：低温诱导时大肠杆菌 BL21菌体上清液中Tat-GFP融合蛋白量更高，所生产的Tat-GFP融合蛋白既具备穿膜活性又具有易于检测的绿色荧光。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏维恒	吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室	6	10	2.0	3.0