穿膜肽TAT的表达与活性的初步研究

• 作者: 张书祥 张兰馨 张部昌 徐琪寿 马子敏
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 穿膜肽 融合表达 细胞定位 血脑屏障 基因 tat 细胞膜
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 431-433,437
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2009.05.009

摘要

目的:构建原核表达载体,获得纯化的融合蛋白TAT-GFP,以便于考查TAT的细胞定位及穿膜功能.方法:将TAT基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因串联于原核表达载体pET28a中,通过IPTG诱导融合表达.分离纯化的融合蛋白与BHK-21细胞共孵育一定时间后,激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的定位;同时以尾静脉注射方式进行小鼠给药实验,一定时间后麻醉,将主要器官组织取出、固定、冰冻切片,荧光显微镜下观察蛋白的分布情况.结果:DNA测序证明成功构建融合蛋白表达载体pET28a-tat-gfp.经诱导表达、纯化可获得纯度为85%以上的融合蛋白TAT-GFP.细胞实验表明,融合蛋白可迅速透过细胞膜并广泛分布于BHK-21细胞内,其中尤以细胞核内最多,而对照组GFP蛋白则不能穿透细胞膜入胞;动物实验中,给药2 h后即可观察到TAT携带GFP到达小鼠的各主要器官和组织,甚至穿透血脑屏障分布于脑组织部分.结论:融合表达的穿膜肽TAT具有一定的携带生物分子(GFP)穿膜功能,本研究为深入了解TAT的性质及其未来应用奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张书祥	安徽大学生命科学学院	23	194	6.0	13.0
2	张部昌	安徽大学生命科学学院	82	550	12.0	20.0
3	徐琪寿	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	61	580	13.0	22.0
4	张兰馨	安徽大学生命科学学院	3	23	3.0	3.0
5	马子敏		1	3	1.0	1.0