两种方式制备的原核表达含TAT蛋白转导域融合蛋白穿膜能力比较

• 作者: 刘静 夏圣 季宝菊 招倩倩 王胜军 田雨香 蔺昕 许化溪 许逊 邵启祥
• 来源期刊: 江苏大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 转导结构域 透析 复性 包涵体 穿膜效率
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 466-471,后插1
• 页数: 7页
• 分类号: R392.12
• 字数: 5070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2008.06.002

摘要

目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法.方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力.结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力.结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率.