可溶性TAT PTD-Ngb融合蛋白的原核表达、鉴定与纯化及其对皮质神经元的跨膜转导

• 作者: 周国钰 朱灿胜 楼之茵 熊洁萍 胡学强 胡骏 陆正齐
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白转导域 脑红蛋白 可溶性原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 146-151
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4504字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2007.02.006

摘要

[目的]构建含蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)与脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)融合基因的表达质粒,原核表达可溶性TAT PTD-Ngb,并鉴定、纯化,检测TAT PTD-Ngb对皮质神经元的跨膜转导功能.[方法]提取SD大鼠脑组织总RNA,通过RT-PCR法构建编码TAT PTD-Ngb的融合基因,克隆入pET28b原核表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析及可溶性鉴定,利用所表达的目的蛋白上的6个组蛋白用Ni-NTA琼脂进行亲和层析纯化,将不同浓度纯化的融合蛋白与原代培养皮质神经元共孵育2 h,用Western-blot分析融合蛋白的跨膜转导.[结果]成功构建了含有TAT PTD-Ngb的原核表达载体,插入片段500 bp,成功表达并纯化了可溶性TAT PTD-Ngb融合蛋白,相对分子质量约为20 k,Western blot鉴定显示表达蛋白具有抗原性,并具有转导入原代培养皮质神经元的功能,随给予蛋白浓度的增高进入神经元内的融合蛋白量增高.[结论]可溶性融合蛋白TAT PTD-Ngb可转导入皮质神经元,对进一步研究Ngb的功能及蛋白转导技术的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆正齐	中山大学附属第三医院神经病学科	133	645	14.0	17.0
2	胡学强	中山大学附属第三医院神经病学科	172	945	16.0	21.0
3	楼之茵	中山大学附属第三医院神经病学科	6	43	4.0	6.0
4	周国钰	中山大学附属第三医院神经病学科	6	34	3.0	5.0
5	胡骏	中山医学院药理教研室	1	3	1.0	1.0
6	朱灿胜	中山大学附属第三医院神经病学科	15	73	4.0	8.0
7	熊洁萍	中山医学院药理教研室	1	3	1.0	1.0