HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定

• 作者: 卢春 程晓东 邱会平
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Tat基因 原核表达 融合蛋白 人免疫缺陷病毒 卡波氏肉瘤病毒
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 308-312
• 页数: 5页
• 分类号: R34|Q78
• 字数: 4387字
• 语种: 中文

摘要

目的:在大肠埃希菌中表达人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)反式激活蛋白(trans activative transcription protein,Tat),为进一步研究可溶性Tat在艾滋病相关卡波氏肉瘤(AIDS-KS)致病过程中的作用提供材料.方法:以本实验室保存的重组质粒pcDNA3.1(+)/Tat101为模板,PCR扩增目的基因Tat.将PCR产物克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-28a(+)-Tat.将重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹鉴定后,通过镍亲和层析柱纯化.纯化后蛋白采用虫荧光素酶报告实验进行功能验证.结果:限制性内切酶酶切和基因测序证实,成功构建了含有Tat基因的重组原核表达质粒.蛋白质印迹结果显示,His融合蛋白在大肠埃希菌中得到正确表达,纯化后获得了相对分子质量为18×103的融合蛋白.虫荧光素酶报告实验证实,Tat与HIV-1长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)具有结合能力.结论:重组质粒pET-28a(+)-Tat能在大肠埃希菌BL21(DE3)中稳定表达Tat蛋白,镍亲和层析柱纯化的His-Tat融合蛋白具有生物学功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	程晓东	南京医科大学微生物学与免疫学系	2	1	1.0	1.0
3	邱会平	南京医科大学基础医学实验教学中心	2	1	1.0	1.0