Tat融合蛋白表达载体TAT-OCT4的克隆化及蛋白表达研究

• 作者: 万志红 王建军 谢国明 赵平 辛绍杰 靳雪源
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: OCT4蛋白 诱导性多能干细胞 蛋白转导结构域 载体构建
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 页码范围: 861-864
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 3198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2013.08.023

摘要

目的构建重组表达载体TAT-OCT4，在E.coli BL21中高效表达并纯化融合蛋白。为进一步通过蛋白转导方式诱导多能干细胞提供物质基础。方法经RT-PCR获得编码人OCT4的全基因序列，连接到原核表达载体TAT-V2上，得到重组表达载体TAT-OCT4，转化大肠埃希菌，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导TAT-OCT4融合蛋白的表达。表达产物用SDS-PAGE鉴定，亲和层析柱纯化融合蛋白，并应用Western Blot检测蛋白的特异性，应用免疫荧光检测融合蛋白转导人皮肤成纤维(human skin fibroblasts，HSF)细胞的效果。结果成功构建了TAT-OCT4融合蛋白的原核表达载体，在诱导下获得了高效表达并纯化了融合蛋白，Western Blot鉴定正确。免疫荧光提示融合蛋白可快速转导入HSF细胞内。结论 TAT-OCT4融合蛋白可以安全，高效地转导入HSF细胞中。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	辛绍杰		103	831	15.0	25.0
2	王建军		22	57	3.0	7.0
4	赵平		28	79	5.0	8.0
5	靳雪源		17	97	5.0	9.0
6	谢国明		5	15	2.0	3.0
7	万志红		16	60	5.0	7.0