HCBP12融合蛋白的表达、纯化及多抗制备

• 作者: 成军 李华 李康 李越 林原 王琦
• 来源期刊: 中国临床药理学与治疗学
• 关键词: HCBP12 融合蛋白 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 425-430
• 页数: 6页
• 分类号: R45|R51
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2501.2008.04.013

摘要

目的:构建丙型肝炎病毒核心抗原结合蛋白12(HCV Core binding protein,HCBP12)原核表达载体,在大肠埃希菌中进行表达、纯化HCBP12融合蛋白并制备兔抗HCBP12多克隆抗体.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HCBP12基因片段,插入至原核表达载体pET-32a(+)中 ,构建原核表达载体pET-32a(+)-HCBP12,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得HCBP12融合蛋白的可诱导性表达, 并通过SDS-PAGE电泳、Western Blot免疫印迹分析和证实融合蛋白表达的特异性.利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗HCBP12多克隆抗体.以纯化HCBP12为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测.结果:HCBP12融合蛋白表达成功.SDS-P AGE分析表明其为包涵体表达.成功获得了融合蛋白纯品及兔抗HCBP12多克隆抗体.ELISA法表明多克隆抗体效价>1:512000, Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好.结论:成功表达、纯化HCBP12融合蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗HCBP12多克隆抗体,为研究HCBP12蛋白的生物学功能及丙肝的临床治疗提供了重要的实验工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李华	大连医科大学药学院药理教研室	21	64	5.0	7.0
2	林原	大连医科大学药学院药理教研室	60	445	11.0	18.0
3	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
4	王琦	大连医科大学药学院药理教研室	14	55	4.0	7.0
8	李越	大连医科大学药学院药理教研室	7	8	2.0	2.0
10	李康	北京地坛医院传染病研究所	3	3	1.0	1.0