重组UK1 14 融合蛋白的表达纯化及免疫组化定位

• 作者: 尹淑琴 常泓 朱宏 梁娟 范艳
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 重组 UK114 多克隆抗体 蛋白免疫印迹 免疫组织化学定位
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 95-100
• 页数: 6页
• 分类号: S827.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201811048

摘要

[目的]UK1 14(山羊肝脏肿瘤抗原)是钙蛋白酶系统的主要成分钙蛋白酶ⅠCAPN1/S1(μ-calpain)的激活蛋白,本研究旨在利用原核表达系统体外制备重组 UK114 蛋白,获得融合蛋白制备抗体,对其进行组织定位,为深入研究其功能提供蛋白水平的证据.[方法]将重组质粒 pGEX-4T-3-UK1 14 转化入大肠杆菌 BL21(DE3)中诱导表达、纯化,用凝血酶对 GST-UK1 14 融合蛋白进行酶切,制备抗 UK114 多克隆抗体,免疫组化分析重组 UK1 14 蛋白在组织中的分布情况.[结果]GST-UK114 融合蛋白的分子量为40 kD,酶切得到目标蛋白,其分子量为14 kD;用UK1 14 蛋白免疫家兔,得到了理想的高效价兔抗 UK114 多克隆抗血清,效价大于1∶125 000,抗血清经纯化得到兔抗UK1 14 多克隆抗体,效价大于 1∶25 000;Western blot分析结果显示,GST-UK114 融合蛋白在约 40kD 处有一明显条带,融合蛋白酶切后在 1 4 kD附近出现一条带;免疫组织化学分析表明,免疫组化染色主要发生在细胞质中,山羊肝脏组织中肝小叶边缘区有肝细胞出现棕色的阳性着色,部分肝窦内皮细胞也有棕色的阳性着色.肾脏皮质中的肾小管上皮细胞有棕色的阳性着色出现,肾小球中没有出现着色.[结论]试验成功获得纯化后的重组 UK114 蛋白,制备的抗UK114 抗体可以与正常山羊肝脏和肾脏组织中的 UK1 14 蛋白结合,为其后续分子伴侣特性以及抗肿瘤特性的研究提供一定的蛋白试验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹淑琴	山西农业大学生命科学学院	13	56	4.0	7.0
2	范艳	山西农业大学生命科学学院	7	44	3.0	6.0
3	朱宏	山西农业大学生命科学学院	6	19	2.0	4.0
4	梁娟	山西农业大学生命科学学院	11	63	4.0	7.0