pET14b-His-TAT-ERK2和无活性突变体pET14b-His-TAT-ERK2(AF)原核表达载体的构建和表达

• 作者: 姚咏明 杨丽萍
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 学科: 医学
• 关键词: 转录激活因子 细胞外信号调节激酶2 蛋白转导 载体构建
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 94-97
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2008.02.008

摘要

目的:构建基于转录激活因子(TAT)技术的细胞外信号调节激酶(ERK)2及其无活性突变体ERK2(AF)原核载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-Flag-ERK2和pcDNA3-Flag-ERK2(AF)质粒中扩增出ERK2和ERK2(AF)基因,插入pETl4b-His-TAT载体中,构建重组质粒pET14b-His-TAT-ERK2和pETl4b-His-TAT-ERK2(AF),并诱导原核表达、纯化融合蛋白.采用Western blot方法检测表达蛋白的His标签.结果:酶切和测序结果表明.扩增的ERK2和ERK2(AF)基因正确,大小为1 082 bp;10%SDS-PAGE凝胶电泳可见原核表达纯化得到高纯度目的蛋白,大小为41 kD;Western blot检测显示,原核蛋白带有His标签.结论:成功构建了ERK2和ERK2(AF)的原核表达载体,该载体能在大肠杆菌中表达,纯化得到了His-TAT-ERK2和His-TAT-ERK2(AF)蛋白,为研究ERK2蛋白的功能提供了重要工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚咏明	解放军总医院第一附属医院烧伤研究所	298	2402	21.0	30.0
2	杨丽萍	解放军总医院第一附属医院烧伤研究所	6	64	5.0	6.0