HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 庞强 廖文婷 曹洁 李存枚 潘卫 王锦红 邓松华 黄德圣
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1/遗传学 大肠杆菌/遗传学 基因产物,tat 基因表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: R373.51|R378.2|R394|R392.11
• 字数: 3888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.01.002

摘要

目的 构建HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coli B121(DE3)中进行高效表达和纯化.方法 应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(AC)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定.结果 构建了pET32a-Tat(cn)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17 mg/nd,相对分子质量为31 ku.间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应.结论 成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1 Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1 Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘卫	第二军医大学微生物学教研室	64	255	8.0	12.0
2	邓松华	安徽医科大学病理生理学教研室	34	128	6.0	9.0
3	曹洁	第二军医大学微生物学教研室	110	904	16.0	23.0
4	李存枚	安徽医科大学病理生理学教研室	4	3	1.0	1.0
5	王锦红	第二军医大学微生物学教研室	7	7	2.0	2.0
6	黄德圣	安徽医科大学病理生理学教研室	3	1	1.0	1.0
7	廖文婷	第二军医大学微生物学教研室	5	13	2.0	3.0
8	庞强	第二军医大学微生物学教研室	5	4	1.0	2.0