HIV-1流行株去糖基化修饰gp41突变体的构建及其表达和纯化

• 作者: 符健 邵继平
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1病毒 包膜糖蛋白gp41 去糖基化突变体 表达和纯化
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 579-583
• 页数: 5页
• 分类号: R373.32
• 字数: 4314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.05.013

摘要

目的:构建HIV-1ⅢB标准株、中国大陆地区主要流行株CRF-BC和海南省流行株CRF-AE野生型和突变型gp41表达载体,获得gp41重组蛋白.方法:利用基因定点突变的方法,将HIV-1ⅢB、CRF-BC和CRF-AE流行株野生型gp41基因中特定的N611Q糖基化位点天冬酰胺Asn突变为谷氨酰胺Gln,使该位点去糖基化.利用基因工程技术构建野生型pcDNA3.1-gp41和突变型pcDNA3.1-Mgp41表达载体.取测序正确的重组质粒转染293 T细胞,重组蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后采用免疫杂交方法进行分析.结果:测序结果显示野生型gp41的N611糖基化位点均由天冬酰胺(Asn)的编码基因(AAU)突变为谷氨酰胺(Gln)的编码基因(GAA),成功构建了野生型和突变型gp41表达载体.琼脂糖凝胶电泳分析显示野生型和突变型HIV-1 gp41基因大小约为700 bp,Western blot免疫杂交结果显示在26 kD处出现目的条带,与预期一致.结论:成功构建了HIV-1流行株去糖基化修饰gp41突变体,为研究去糖基化修饰gp41蛋白与疾病发生发展的分子机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	符健	海南医学院海南省药物临床前药理毒理学研究重点实验室	72	333	9.0	16.0
2	邵继平	海南医学院海南省药物临床前药理毒理学研究重点实验室	2	5	1.0	2.0