PreIQ及其突变体载体构建表达纯化和活性鉴定

• 作者: 孙威 封瑞 毛楠 王红梅 赵美眯 赵金生 郝丽英 郭凤 高青华
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白 PreIQ 突变体 pull-down
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 293-296
• 页数: 4页
• 分类号: R966
• 字数: 3769字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建心肌L型钙通道片段PreIQ及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化和活性鉴定.方法 将PreIQ及其突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导PreIQ及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化.采用SDS-PAGE鉴定目的蛋白分子质量和相对纯度.采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度.采用pull-down法检测纯化后蛋白的活性.结果 PreIQ及其突变体融合蛋白得到了大量表达;纯化的PreIQ及其突变体具有较高的纯度;纯化后蛋白能与钙调蛋白(CaM)结合,具有生物活性.结论 本研究成功构建了PreIQ及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得具有生物活性的PreIQ及其突变体融合蛋白,为深入研究PreIQ的生能学功能奠定基础.