钙调蛋白镁结合位点突变体载体的构建、表达纯化及鉴定

• 作者: 孙雪菲 封瑞 晏珊 李卓 梁洪玥 赵美眯 邵冬雪 郝丽英 郭凤
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 钙调蛋白 突变体 融合蛋白 pGEX-6P-3
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 394-397
• 页数: 4页
• 分类号: R96
• 字数: 3239字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2016.05.003

摘要

目的：构建钙调蛋白3种镁离子结合位点突变体的质粒载体，并进行表达纯化及鉴定，为深入研究钙调蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用钙调蛋白cDNA进行点突变，制备3种镁离子结合位点突变的cDNA。将突变后的cDNA分别插入pGEX?6P?3载体，制备钙调蛋白突变体载体质粒。质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞，培养大肠杆菌，并诱导GST融合蛋白表达。利用Glutathione?Sepharose 4B珠子和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序证实成功构建钙调蛋白突变体质粒；表达纯化得到的钙调蛋白突变体经电泳图鉴定纯度较高，浓度约1.0 mg/mL。结论本研究成功构建了钙调蛋白镁结合位点突变体融合蛋白原核表达质粒，分离纯化可获得较高浓度较高纯度的钙调蛋白突变体。