重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达

• 作者: 吕广艳 崔颖 王辉 谢策 赵莹 高颖 魏晓晴
• 来源期刊: 医学信息
• 学科: 生物学
• 关键词: MLCK 重组载体 突变体
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2373-2375
• 页数: 3页
• 分类号: Q71
• 字数: 2039字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-1959.2009.11.053

摘要

目的 构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能.方法 利用试剂盒对MLCK ATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达:利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体在细胞中的分布:运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度.结果 重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带.结论 重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕广艳		7	11	2.0	3.0
2	赵莹		9	18	3.0	4.0
3	魏晓晴		6	9	1.0	2.0
4	崔颖		8	24	3.0	4.0
5	王辉		2	1	1.0	1.0
6	谢策	大连医科大学生化教研室	1	0	0.0	0.0