肝细胞生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的影响

• 作者: 刘志贞 常冰梅 张悦红 李美宁 牛勃 程牛亮
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HGF基因 内皮细胞 增殖 迁移
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 686-690
• 分类号: R34
• 字数: 5241字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.08.003

摘要

目的:观察HGF基因对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的影响.方法:从已有质粒pRc/CMV-HGF中扩增出HGF基因,将其克隆到含增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-HGF,酶切及测序鉴定正确后,用脂质体将重组质粒pEGFP-HGF转染到人脐静脉细胞株ECV304中,G418筛选获得稳定表达细胞克隆,采用荧光显微镜观察、RT-PCR、免疫细胞化学方法检测鉴定重组质粒的表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测稳定表达细胞中HGF 的含量;再以MTT法检测转染重组质粒后细胞增殖的改变,Transwell Migration实验检测细胞迁移能力的改变.结果:所构建重组质粒经酶切图谱分析和序列测定证实构建成功;荧光显微镜下观察到有绿色荧光;RT-PCR证实 HGFmRNA在转染阳性细胞高表达;免疫细胞化学证实转染pEGFP-HGF质粒的细胞有HGF蛋白的表达;ELISA检测细胞培养基中HGF含量可达112.3 ng/ml,MTT法、Transwell Migration测定转染pEGFP-HGF阳性细胞的增殖、迁移能力明显高于对照组(P＜0.01).结论:重组质粒pEGFP-HGF能够在内皮细胞株ECV304转录、表达;表达的活性蛋白HGF刺激ECV304的增殖、迁移,为进一步应用于基因治疗奠定实验基础.