RNAi沉默hTERT基因诱导大肠癌SW480细胞凋亡

• 作者: 刘爱群 罗小玲 葛连英 蔡艳玲 谢裕安
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 大肠癌 hTERT 端粒酶 凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 46-50
• 分类号: R735.3+4|R730.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2011.01.010

摘要

目的:探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达对大肠癌细胞SW480凋亡的影响.方法:构建携带hTERT小发夹干扰RNA(small hairpin RNA,shRNA)的重组表达载体pGPU6/GFP/NeohTERT-shRNA(简称hTERT-shRNA质粒),脂质体法转染SW480细胞,RT-PCR法检测不同转染时间点SW480细胞中hTERT mRNA的表达.TRAP-PCR-ELISA法检测转染后48 h SW480细胞的端粒酶活性,透射电镜观察转染后48 h SW480细胞超微结构.结果:hTERT-shRNA质粒转染48 h时,hTERT-shRNA组SW480细胞hTERTmRNA表达的抑制率显著高于空白组、脂质体组、NC-shRNA组(75.0% vs 39.2%、33.3%、28.0%,P＜0.05).hTERT-shRNA转染组SW480细胞端粒酶活性显著低于空白组、脂质体组、NC-shRNA组(2.242±0.285 vs 2.756±0.089、2.693±0.225、2.691±0.120,P＜0.05).hTERT-shRNA质粒转染后的SW480细胞体积明显缩小、细胞核同缩、染色质不均匀地沿核膜下聚集、空泡形成增多,出现典型的凋亡形态.结论:RNAi可有效沉默SW480细胞中hTERT的表达,降低SW480细胞端粒酶活性,诱导SW480细胞凋亡.