家蚕真核细胞翻译起始因子(BmeIF4E)基因的克隆、表达及功能分析

• 作者: 于威 张耀洲 韩剑秋
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 BmeIF4E 原核表达 亚细胞定位 RNAi
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 206-213
• 分类号: S816.7
• 字数: 6133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.002

摘要

本研究从自建的家蚕(Bombyx mori)蛹期cDNA文库中筛选到一条cDNA序列,发现其在序列和结构上与其他物种的真核细胞翻译起始因子钮基因(BmeIF4E)具有较高的相似性,推测可能是家蚕eIF4E基因,将该序列命名为BmeIF4E,GenBank登录号为DN443192.为研究BmeIF4E的生物学功能,将该基因插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-BmeIF4E,转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化该重组蛋白,制备多克隆抗体.利用家蚕Bm5细胞进行亚细胞定位研究结果表明,BmeIF4E既存在于细胞质中也存在于细胞核中.荧光定量PCR和Westem blot分析结果表明,在不同组织及发育时期该基因的表达有差异,在各组织中BmeIF4E表达量从高到底依次是马氏管、表皮、脂肪体、气管、卵巢、中肠、头和丝腺;在卵、幼虫、蛹和蛾4个发育时期中,蛾中的表达量最高,其次是蛹,再次是五龄幼虫,而在卵中表达量较低.以该基因的ORF为模板体外转录dsRNA,脂质体法转染Bm5细胞,72 h后提取细胞总蛋白作Western blot检测RNA干扰情况,发现BmeIF4E基因被干扰后,总蛋白中目的蛋白含量明显低于阴性对照组.MTT法检测结果表明,干扰后细胞活力也明显下降.研究结果提示,BmeIF4E作为一种重要的管家基因,在家蚕的整个生命周期中均有表达,起着十分重要的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于威	浙江理工大学生物化学研究所	42	78	4.0	7.0
5	张耀洲	浙江理工大学生物化学研究所	87	372	9.0	15.0
9	韩剑秋	浙江理工大学生物化学研究所	2	11	2.0	2.0