大鼠骨髓来源树突状细胞体外培养体系的优化

• 作者: 刘炜 张琪 李团结 李敏如 汪国营 陈伟 陈文捷 陈规划
• 来源期刊: 器官移植
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 重组大鼠白介素-4 脂多糖 混合淋巴细胞反应 细胞培养
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 135-140
• 分类号: R3
• 字数: 4882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2011.03.004

摘要

目的 探讨优化大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)体外培养体系的方法.方法 应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant rat GM-CSF,rrGM-CSF) 20 μg/L和重组大鼠白介素(recombinant rat interleukin,rrIL)- 4 10 μg/L诱导分化Lewis大鼠骨髓单个核细胞,获得未成熟DC(immature DC,imDC).第6日加入终含量为100 μg/L的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞成为成熟DC(mature DC,mDC).用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术鉴定细胞表型、双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测DC培养上清液中白介素(IL)-12、IL-10的含量,并以Brown Norway大鼠脾脏 T 淋巴细胞为反应细胞,做混合淋巴细胞反应检测,观察DC刺激 T 淋巴细胞增殖能力.结果 经细胞形态学、流式细胞术及混合淋巴细胞反应三方面鉴定,证实所培养细胞为DC.体外培养第6日,见大量增殖细胞集落,细胞高表达OX62.LPS刺激细胞后,细胞伪足样突起明显增多,细胞逐渐呈半悬浮、悬浮生长,细胞表面高表达主要组织相容性抗原复合体(MHC)Ⅱ类分子和共刺激分子(CD40、CD86).与imDC比较,mDC分泌IL-10和IL-12显著增加,刺激同种异体 T 淋巴细胞增殖的能力显著提高.结论 通过采用调整rrGM-CSF和rrIL- 4 的用量等方法优化体外培养体系诱导大鼠骨髓单个核细胞,可分化出大量骨髓源性DC.