MEKK3稳定表达细胞株的建立及其对A549细胞增殖的影响

• 作者: 兰风华 沈瑞明 王志红 董荔红 钱凤英 黄俏佳
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: MEKK3基因 基因克隆 基因转染 荧光实时定量PCR 四唑盐比色测定
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 386-391
• 分类号: Q78
• 字数: 5104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.05.003

摘要

目的 构建人MEKK3基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对肺腺癌细胞增殖的影响.方法 从A549细胞中提取总RNA,应用RT-PCR扩增MEKK3 cDNA的全长序列后克隆入pcDNA3.1/hygro(+)质粒中,构建成MEKK3基因的真核表达载体,然后转染入人肺腺癌A549细胞中,潮霉素筛选稳定转染克隆,通过MTT实验,研究转染MEKK3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误,Western印迹检测结果显示MEKK3基因在A549细胞中具有良好的表达;荧光实时定量PCR结果表明MEKK3基因在其稳定转染的A549细胞克隆中表达上调,与空载体稳定转染及未转染细胞比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);MTT结果显示MEKK3表达上调的稳定克隆组,A549细胞的增殖活性显著增强(A570=0.876 1±0.074 5),明显高于空载体稳定转染组(A570=0.582 8±0.070 3)及未转染亲代细胞组(A570=0.584 9±0.035 2),差异具有统计学意义(P＜0.01),而后两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MEKK3表达上调可导致肺腺癌细胞的增殖增强.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志红	南京军区福州总医院分子医学中心	25	96	3.0	9.0
2	兰风华	南京军区福州总医院分子医学中心	88	314	9.0	12.0
3	黄俏佳	南京军区福州总医院分子医学中心	10	31	3.0	5.0
4	董荔红	南京军区福州总医院分子医学中心	10	14	3.0	3.0
5	沈瑞明	南京军区福州总医院分子医学中心	2	1	1.0	1.0
6	钱凤英	南京军区福州总医院分子医学中心	3	3	1.0	1.0